يتطلب تنوع الالتهابات البكتيرية تحديدًا واضحًا للممرض وتحديد نوعه. لتحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة ، يتم مساعدة علماء الأحياء الدقيقة من خلال خصائصه الصخرية - قابلية الميكروب للتلطيخ بأصباغ مختلفة. تسمح لك هذه الطريقة باستكشاف مورفولوجيا العامل الممرض. تعد الخواص الصغرية للبكتيريا ذات أهمية كبيرة للبحث العملي والنظري في مجال علم الأحياء الدقيقة.
الأبحاث الميكروبية
في علم الجراثيم ، هناك العديد من الطرق لتلوين الكائنات الحية الدقيقة. كل منهم يعتمد على الخصائص الصغرية للبكتيريا. يسمح لك التلوين بتحديد شكلها وهيكلها وحجمها وموقعها النسبي. هذا يسمح بحل مشاكل تنظيم أنواع الكائنات الحية الدقيقة في البيولوجيا العامة وعلم الأحياء الدقيقة المقارن.
لماذا ترسمهم
البكتيريا عملياالكائنات الحية الشفافة ، وبدون استخدام التلوين ، تكون مرئية بشكل سيئ للفحص المجهري التقليدي. يمكنك استخدام أنواع خاصة من الفحص المجهري (تباين الطور ، المجال المظلم) لدراسة الأشياء ، ولكن أسهل طريقة هي التلوين ، وبعد ذلك تصبح البكتيريا مرئية في مجهر الضوء التقليدي.
تحضير العينة
بغض النظر عن تقنية التلوين المستخدمة ، هناك قواعد موحدة لإعداد الكائن قيد الدراسة. المراحل التالية إلزامية:
- الأدوات المعقمة تصنع مسحة على شريحة زجاجية.
- يتم تجفيف العينة. يتم ذلك في درجة حرارة الغرفة أو باستخدام خزانات التجفيف.
- تليها مرحلة التثبيت - يتم ربط الكائنات الحية الدقيقة بالزجاج بمركبات خاصة.
- تلطيخ صحيح - العينة مغطاة بصبغة لفترة زمنية محددة ، وبعد ذلك يتم غسلها.
- التجفيف النهائي - تجفف العينة مرة أخرى.
الأصباغ الأكثر شيوعًا
تعتمد الأصباغ الأكثر استخدامًا على الأنيلين بقيم حمضية مختلفة (pH). معظم الأصباغ مساحيق مخففة في الكحول.
الأصباغ التي فيها الكاتيونات عوامل التلوين تسمى أساسية (الرقم الهيدروجيني أكبر من 7). يمكن استخدامها لتلوين الكائنات الحية الدقيقة باللون الأحمر (البنفسجي ، السافرانين) ، البنفسجي (البنفسجي الميثيل ، الثيونين) ، الأزرق (الميثيلين الأزرق) ، الأخضر (الأخضر (الملكيت الأخضر) ، البني (الكريسويدين) والأسود (الإندولين).
الأصباغ ، التي تكون فيها عوامل التلوين الأنيونات ، تسمى الحمضية (الرقم الهيدروجيني أقل من 7). سوف يلطخون العينة باللون الأحمر (يوزين) أو الأصفر (البيكرين) أو الأسود (النيجروزين).
هناك مجموعة من الأصباغ المحايدة (على سبيل المثال ، رودامين ب) ، حيث تعمل كل من الكاتيونات والأنيونات كعوامل تلوين.
الثقافة حيا او ميتا
تنقسم طرق التلوين إلى مجموعتين وفقًا لشكل الحياة لعينة الاختبار.
- تلطيخ حيوي (مدى الحياة). تستخدم هذه الطريقة في دراسة خصائص الكائنات الحية الدقيقة في دراسة الأنسجة الحية ، مما يجعل من الممكن مراقبة العمليات الحيوية للميكروبات. بالنسبة لهذا التلوين ، يتم استخدام أصباغ ذات سمية منخفضة وقوة اختراق عالية.
- تلطيخ ما بعد الحيوية. هذا هو تلطيخ الكائنات الحية الدقيقة الميتة أو المقتولة. بفضل الخصائص الحركية للبكتيريا ، يحدد علماء الأحياء الدقيقة هيكلها. هذا هو التلوين الأكثر استخدامًا.
موجب الجرام وسالب الجرام
هذه هي خصائص البكتيريا التي يمكن العثور عليها في تعليمات الأدوية المختلفة. تعتمد هذه الطريقة في دراسة الخواص الصخرية للبكتيريا على استخدام صبغة الجنطيانا البنفسجية وتثبيت اليود. هذه هي تقنية هانز كريستيان جرام ، الطبيب الدنماركي الذي اقترحها عام 1884. نتيجة هذا التلوين ، تنقسم البكتيريا إلى مجموعتين:
- غرام (+) - يتحول إلى اللون الأزرق(المكورات العنقودية والمكورات العقدية).
- غرام (-) - صبغ باللون الوردي إلى الأحمر (البكتيريا المعوية ، السالمونيلا ، الإشريكية القولونية).
نتائج تلطيخ مختلفة ترجع إلى الخصائص الحركية المختلفة للجدران البكتيرية. لا تزال طريقة صبغ غرام هي الطريقة الرئيسية في تشخيص بعض الأمراض المعدية.
تقنيات تلطيخ أخرى
دعونا نوصيف بعض الطرق الأخرى المستخدمة على نطاق واسع في علم الجراثيم.
طريقة
يمكن رؤية الجراثيم
يسمح لك تلوين Tsiel's fuchcin برؤية الأبواغ البكتيرية. بعد تلطيخها باللون الوردي ، يمكن رؤيتها بوضوح على خلفية البكتيريا الزرقاء. هذه الطريقة هي أيضًا أداة لعلم الجراثيم ولها أهمية عملية كبيرة.
