في التحديد التفاضلي للبكتيريا المعوية وبعض الضمات ، يحتل تفاعل Voges-Proskauer مكانًا خاصًا. يعتمد الاختبار على قدرة البكتيريا على تخمير الجلوكوز لتكوين الأسيتوين.
جوهر عملية البحث
في علم الأحياء الدقيقة ، غالبًا ما يستخدم تفاعل فوجس-بروسكاور للتمييز داخل عائلة يرسينيا من البكتيريا المعوية (بما في ذلك مسببات مرض السل الكاذب والتهاب الأمعاء والقولون) والإشريكية القولونية والأيروبس المكونة للجراثيم. يتم تصور النتيجة عن طريق تلوين الوسيط عند إضافة كواشف معينة.
ينتمي هذا الاختبار إلى سلسلة IMViC (اختصار لـ Indol ، Methyl Red ، Voges-Proskauer i Citrate) - مجموعة من اختبارات التعريف بما في ذلك التعريفات التفاضلية:
- مع إندول ، بناءً على تكسير التربتوفان إلى إندول ، يستخدم في وجود كاشف كوفاكس أو إيرليش ؛
- باستخدامmethylroth ، أو methyl red ، الذي يكتشف درجة حموضة معينة نتيجة لاستقلاب الجلوكوز ؛
- تفاعلات Voges-Proskauer للكشف عن أسيتيل ميثيل كاربينول ؛
- الاستفادة من السترات مع تغير اللون نتيجة قلونة الوسط.
جوهر العملية هو تصور وجود البكتيريا المشخصة بسبب تفاعل الأسيتوين الذي تشكله مع البوتاس الكاوي في وجود الأكسجين. يتأكسد أسيتيل ميثيل كاربينول إلى ثنائي أسيتيل ، والذي يشكل مركبًا أحمر أو ورديًا ساطعًا. زيادة حساسية الاختبار بإدخال alpha-naphthol قبل إضافة البوتاس الكاوي.
اختبار الإعداد
تتضمن صياغة تفاعل Voges-Proskauer الزراعة الأولية للكائنات الحية الدقيقة. تُزرع ثقافة نقية على وسيط التشخيص التفاضلي لكلارك ، وهو أحد أشكاله مرق كلارك (بدون إضافة أجار أجار). يتم استخدام الوسط الجاهز أو إعداده بشكل مستقل. المكونات تشمل:
- 5g الببتون ؛
- 5 جرام جلوكوز ؛
- 5 جرام فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة ؛
- 1L نواتج التقطير.
أثناء الدراسة ، يتم تلقيح المزرعة بحلقة جرثومية معقمة في وسط سائل. الكمية - 5 مل في أنبوب اختبار بالإضافة إلى التحكم. تتم الحضانة عند درجة حرارة 35-37 درجة لمدة يومين. بعد ذلك ، يتم إجراء دراسة تفاعل Voges-Proskauer على مراحل:
- 2، 5 مل من المرق يتم نقلها إلى أنبوب معقم.
- أضف ست قطرات من ألفا نافثول (محلول كحول 5٪).
- أضف 40٪محلول بوتاسيوم كاوي بكمية 0.1 مل او قطرتين
- يتم التقليب عن طريق هز أنبوب الاختبار برفق.
- قم بتقييم النتيجة بعد 15 دقيقة من بداية التجربة
طريقة اختبار بديلة هي الحضانة بين عشية وضحاها ، والتي يتم تقليل وقتها إلى 18 ساعة أو ما يصل إلى يوم واحد. بالإضافة إلى هذه الطريقة ، يتم أيضًا استخدام اختبار سريع: يتم إدخال مزرعة في حلقة في 2 مل من الوسط ، محتضنة لمدة أربع ساعات تقريبًا ، ثم تضاف الكواشف بكمية متساوية من 2-3 قطرات ، مختلطة مع يتم تقييم النتيجة بعد عشر دقائق
السيطرة هي أحد العوامل المسببة للالتهاب الرئوي Klebsiella pneumoniae - سلالة atcc 13883.
تقييم النتيجة
بعد الوقت المطلوب بعد إضافة الكواشف (من 5 إلى 15 دقيقة) ، يجب ملاحظة اللون الأحمر الكرز مع رد فعل إيجابي واضح ، الأحمر والوردي - مع رد فعل إيجابي ضعيف. لم يتم تسجيل أي تغيير كنتيجة سلبية.
يمكن أن يعطي فائض البوتاس الكاوية في محلول تقليدًا لرد فعل إيجابي ، وتلطيخ بلون النحاس. في هذه الحالة ، يجب تسجيل الاستجابة السلبية للمستعمرة المختبرة. أيضًا ، يظهر تلطيخ النحاس في الحالات التي يتم فيها إجراء التقييم بعد ساعة من إدخال الكواشف.
عند تقييم النتيجة ، يجب مراعاة أن الزراعة المطولة للكائنات الدقيقة المدروسة (أكثر من ثلاثة أيام) تؤدي إلى تحمض الوسط ، مما قد يؤدي إلى نتيجة غير صحيحة للدراسة. قد يكون رد الفعل خفيفًا أو إيجابيًاسلبي كاذب.
متطلبات اختبار الكواشف
يجب أن تفي كواشف Voges-Proskauer بمتطلبات مثل التركيز الصحيح والنقاء العالي والاستقرار ، والذي يتحقق من خلال التخزين المناسب.
تحتوي مجموعات الاختبار الجاهزة للاستخدام عادةً على كواشف لـ 100 استخدام أو أكثر وتأتي في قوارير بلاستيكية أو زجاجية ملونة. يتم تنظيم الجودة من خلال الوثائق ذات الصلة.
